AMEKO試劑：特超敏ECL化學(xué)發(fā)光底物

AMEKO試劑：特超敏ECL化學(xué)發(fā)光底物

產(chǎn)品用途:

用于HRP標(biāo)記抗體的Western Blot和HRP標(biāo)記探針的核酸雜交。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、靈敏度高：可檢測(cè)低皮克級(jí)的蛋白；

2、信號(hào)持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)：光信號(hào)持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)達(dá)5小時(shí)；

3、穩(wěn)定試劑：工作液在24小時(shí)內(nèi)保持穩(wěn)定；

4、成像方法：適用于X/射線/膠片、CCD或激光凝膠成像儀；

5、價(jià)格經(jīng)濟(jì)：針對(duì)稀釋的抗體濃度條件進(jìn)行了優(yōu)化，節(jié)省抗體：

一抗：以1 µg/mL儲(chǔ)存液稀釋1:1,000至1:4,000倍

二抗：以1 µg/mL儲(chǔ)存液稀釋1:2,000至1:5,000倍

6、簡(jiǎn)單易用：可替代其它公司的ECL發(fā)光底物，操作步驟無(wú)需進(jìn)行特別優(yōu)化；

使用方法:

1、執(zhí)行常規(guī) SDS-PAGE、轉(zhuǎn)膜和Western Blot步驟。注意用HRP標(biāo)記IgG或用一抗-鏈親和素-生物/素-HRP夾法。

2、Western Blot最后一次洗膜的同時(shí)配制發(fā)光工作液:分別取等體積的A液和B液，放入干凈容器中混合(注意吸取A液和B液的吸頭一定要分開(kāi)，避免試劑污染)。建議立即使用工作液，室溫放置數(shù)小時(shí)后仍可使用但靈敏度略有降低。

3、Western Blot最后一次洗膜后，用鑷子將膜取出，用濾紙吸去多余的洗滌液(切勿接觸膜的蛋白面)，然后置于一潔凈保鮮膜上或塑料容器內(nèi)。

4、根據(jù)膜的大小，按比例滴加配置好的ECL工作液到膜上，確保工作液均勻覆蓋在膜上，放置1-3分鐘。

5、取膜，用濾紙吸去多余的液體，將膜放在兩片保鮮膜中間，隨后進(jìn)行壓片檢測(cè)或化學(xué)發(fā)光成像儀檢測(cè)。

6、壓片檢測(cè):將膜固定于X光膠片暗盒內(nèi)(注意蛋白面向上)。暗房?jī)?nèi)壓X光膠片，分別曝光不同的時(shí)間如數(shù)秒到數(shù)分鐘。顯影沖洗。

7、化學(xué)發(fā)光成像儀檢測(cè):將膜放置到化學(xué)發(fā)光成像儀內(nèi)，參考儀器說(shuō)明書進(jìn)行檢測(cè)。

注:建議第一次曝光60秒，之后可調(diào)整曝光時(shí)間以達(dá)到優(yōu)良結(jié)果。化學(xué)發(fā)光反應(yīng)在底物孵育后的前5-30min期間是烈的。這一反應(yīng)可以持續(xù)幾個(gè)小時(shí)，但強(qiáng)度會(huì)隨時(shí)間下降，如有底物孵育后較長(zhǎng)時(shí)間后曝光，曝光時(shí)間可能需要延長(zhǎng)以獲得較強(qiáng)信號(hào)。

保存條件:室溫運(yùn)輸，4°℃密封避光保存一年，短期可放置室溫。